用标记的特异性抗体,对组织切片中某些化学成分的分布和含量,进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。
本实验是将组织细胞内的抗原可视化过程,可直接在组织切片上原位显示某些蛋白质或多肽类物质,并可精确到亚细胞结构水平。载玻片上的组织细胞经过预处理(脱蜡至水、抗原修复等)后,孵育相应的抗体,此时抗原(多肽、蛋白质、外源性物质等)被第一抗体特异性识别结合,然后把第一抗体作为抗原继续通过第二抗体特异性识别结合(第二抗体上有标记特定物质),若第二抗体标记的特定物质为辣根过氧化物酶(HRP),可与DAB在特定条件下反应形成棕褐色沉淀,最后通过显微镜观察。
免疫组织化学技术可借助显微镜的显像与放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原体及受体等)。在病理学中,免疫组化技术常用来进行肿瘤的诊断及鉴别诊断,也可通过此技术对肿瘤进行更细化的分类。
根据抗原抗体反应(即抗原抗体特异性结合)和化学显色原理,引入附有标记物的外源性抗体(或抗原),使之锚定于组织中相应的抗原(或抗体),标记物经呈色反应来显示待检抗原(或抗体)。
脱蜡与水化-抗原修复-灭活内源性过氧化物酶和生物素-血清封闭-孵育一抗-孵育二抗-DAB显色-苏木素复染-脱水与透明-封片-显微镜镜检。
1、提供固定合格的样本。组织离体后,选择合适的固定液立即固定,固定液的量建议大于组织体积的10-15倍,新鲜标本用合适的容器固定7-72h,标本常温固定即可,切勿冷冻结冰,固定样本常温运输送样。
2、提供准确的抗体信息。
1、客户提供的抗体,要求先做预实验。
2、一抗抗体:客户检测目的蛋白需要由客户提供,并且提供准确的抗体名称、品牌货号,根据抗体货号可以确认抗体的应用(检测种属和检测方式)是否符合基本要求,否则存在风险,具体以预实验为准。接收抗体时,需确认抗体体积与保存温度,建议至少35μl,多余实验结束后会返还。二抗由我司提供,若客户提供特殊来源的一抗(如:绵羊来源),需客户提供相应二抗。
3、同一个抗体用于不同种属、不同脏器,浓度都需做预实验确认。
4、正式实验的趋势我司不做保证。