免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是在免疫学、生物化学与显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称为荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法,称为荧光抗原法。这两种方法总称为免疫荧光技术。但实际工作中荧光抗原技术应用很少,所以常将荧光抗体技术称为免疫荧光技术。
在一张切片上对一个抗原进行标记,即为免疫荧光IF单标,可直接在组织切片上原位显示某些蛋白质或多肽类物质,通常可标记红光或绿光,细胞核用DAPI标记。
免疫荧光染色及成像分析是研究组织形态和组织原位抗原表达不可或缺的检测技术,广泛应用于临床病理和医学及生物学研究的各个领域。凡是可以作为抗原或半抗原的物质,如:蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原体及受体等,都可以在细胞、亚细胞水平检测到。
免疫荧光技术根据抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体(或抗原)标记上荧光基团,再利用这种荧光抗体(或抗原)作为探针来检测固定细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在荧光显微镜下观察,当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光照射后,会发射出一定波长的荧光,从而确定靶抗原(或抗体)的性质与定位,还可利用定量技术(如:流式细胞仪)测定含量。
脱蜡与水化-抗原修复-血清封闭-孵育一抗-孵育二抗-DAPI染核-封片-显微镜镜检。
1、提供固定合格的样本。组织离体后,选择合适的固定液立即固定,固定液的量建议大于组织体积的10-15倍,新鲜标本用合适的容器固定7-72h,标本常温固定即可,切勿冷冻结冰,固定样本常温运输送样。
2、提供准确的抗体信息。
2、一抗抗体:客户检测目的蛋白需要由客户提供,并且提供准确的抗体名称、品牌货号,根据抗体货号可以确认抗体的应用(检测种属和检测方式)是否符合基本要求,否则存在风险,具体以预实验为准。接收抗体时,需确认抗体体积与保存温度,建议至少35μl,多余实验结束后会返还。二抗由我司提供,若客户提供特殊来源的一抗(如:绵羊来源),需客户提供相应二抗。
3、同一个抗体用于不同种属、不同脏器,浓度都需做预实验确认。
4、正式实验的趋势我司不做保证。