尼氏染色实验报告

一、实验对象 –组织标本

二、实验器材及试剂

1、实验器材

名称	厂家	型号
脱水机	上海徕卡仪器有限公司	JJ-12J
包埋机	上海徕卡仪器有限公司	JB-P5
病理切片机	上海徕卡仪器有限公司	RM2016
组织摊片机	浙江省金华市科迪仪器设备有限公司	KD-P
烤箱	上海慧泰仪器制造有限公司	DHG-9140A
载玻片及盖玻片	江苏世泰实验器材有限公司	10212450C
正置光学显微镜	日本尼康	NIKON ECLIPSE CI
成像系统	日本尼康	NIKON DS-U3
荧光扫描仪	麦克奥迪实业集团有限公司	KEasyScan-VM&FE(6切片架)

2、主要实验试剂

试剂	厂家	货号
无水乙醇	天津市大贸化学试剂厂	2410102
二甲苯	天津市大贸化学试剂厂	2410120
钼酸铵亚甲蓝三水合乙酸钠	国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司	10002318 71024544 10018718
中性树胶	北京索莱宝科技有限公司	G8590

三、组织石蜡包埋切片实验步骤

1、取材：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

2、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h--90%酒精2h--95%酒精1h--100%乙醇I 30min--100%乙醇II 30min--100%乙醇II I 30min--二甲苯I 15-30min--二甲苯II15-30min --蜡I 1h--蜡II 1h--蜡III 1h。

3、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚3-5μm。切片漂浮于摊片机45℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

四、尼氏染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-流水洗5min,

2、入缓冲亚甲蓝染液内染10分钟

3、0.2N醋酸盐缓冲液分化1-3分钟，并在显微镜下观察，至尼氏体清晰为止。

4. 4%钼酸铵液处理切片3-5分钟。

5. 蒸馏水洗

6、脱水封片：将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，中性树胶封片。

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